Kromatografi kertas

V. PEMBAHASAN

Kromatografi pada awalnya dianggap semata-mata sebagai bentuk partisi cairan–cairan. Serat selulosa yang hidrofilik dari kertas tersebut dapat mengikat air, setelah disingkapkan ke udara yang lembab, kertas saring yang tampak kering itu sebenarnya dapat mengandung air dengan persentase tinggi, katakan 20 % (bobot/bobot) akan lebih. Jadi kertas itu sebenarnya dapat mengandung air dengan persentase tinggi dan kertas itu dipandang sebagai analog dengan sebatang kolom yang berisi stasioner berair. Zat-zat terlarut itu padahal fase geraknya dapat campur dengan air akan dalam beberapa kasus, malahan fase geraknya adalah larutan itu sendiri (Day & Underwood, 1980).

Kromatografi kertas diperkenalkan oleh Martin dkk pada tahun 1944 sebagai suatu teknik pemisahan campuran asam amino dengan menggunakan selembar kertas saring sebagai pendukung fasa diam, dan fasa bergerak berupa cairan yang terserap diantara struktur pori kertas. Keterbatasan metode ini adalah waktu yang relatif lama dan resolusinya yang rendah. Praktikum kali ini dilakukan percobaan dengan kromatografi kertas yang menggunakan sampel kunyit, rosella, pewarna tekstil dan daus tomat. Pelarut yang digunakan adalah akuades. Pelarut dimasukkan ke dalam chamber, tinggi pelarut yang dimasukkan tidak boleh melebihi tinggi batas bawah kertas. Dimana batas atas 0,5 cm dan batas bawah 2 cm pada kertas saring tersebut untuk mempermudah pengukuran jarak.

Penotolan pada kertas saring yang digunakan adalah kertas saring Whatman karena mempunyai pori-pori yang besar sehingga noda dapat merembes dengan cepat dan teratur. Garis awal pada kertas dengan menggunakan pensil karena pensil terbuat dari grafit yang tidak larut dalam pelarut sedangkan jika digunakan pulpen maka dari tinta pulpen akan larut yang dapat mengganggu penampakan noda. Penotolan diusahakan tidak terlalu banyak karena akan mempengaruhi besar spot. Spot yang terlalu besar tidak baik untuk penampakkan noda karena nodanya dapat melebar kesamping atau ke bawah.

Saat penotolan sampel, penotolan dilakukan 3-5 kali di tempat yang sama, dan dilakukan 2 kali menggunakan mikro pipet. Setelah bercak kering, kertas saring dimasukkan ke dalam chamber dan dibiarkan sampai pelarut naik. Totolan diusahakan tidak terendam dalam oleh pelarut karena akan ikut larut dalam pelarut dan menjadi rusak sehingga tidak dapat diedentifikasi lagi. Kertas juga sebaiknya tidak menyentuh dinding wadah karena dapat mempengaruhi perambatan noda. Susunan serat kertas membentuk medium berpori yang bertindak sebagai tempat untuk mengalirnya fasa gerak. Pemisahan dimungkinkan karena partisi yang kontinyu dari zat-zat antara fase air dan fase bergerak organik. Kesetimbangan partisi antara fasa mobil (pelarut organik) dan fasa diam (air yang terikat pada pori kertas saring) untuk tiap asam amino tergantung dari macam gugus R-nya. Hal ini sesuai dengan literature, dimana komponen-komponen terdistribusi dalam dua fase yaitu fase gerak dan fase diam. Transfer massa antara fase bergerak dan fase diam terjadi bila molekul-molekul campuran serap pada permukaan partikel-partikel atau terserap. Apabila senyawa berwarna, tentu saja noda-nodanya dapat terlihat (Day & Underwood, 1990).

Gambar 1. Chamber
(dokumentasi pribadi )

Selain itu hal ini dapat mengakibatkan terpisahnya campuran asam amino menjadi komponen-komponennya dengan menghitung harga Rf tiap-tiap asam amino tersebut. Menurut literatur (Khopkar, 1990), harga Rf mengukur kecepatan bergeraknya zona realtif terhadap garis depan pengembang. Kromatogram yang dihasilkan diuraikan dan zona-zona dicirikan oleh nilai-nilai Rf. Pengukuran itu dilakukan dengan mengukur jarak dari titik pemberangkatan (pusat zona campuran awal) ke garis depan pengembang dan pusat rapatan tiap zona. Nilai Rf harus sama baik pada descending maupun ascending. Nilai Rf didefinisikan oleh hubungan (Jarak (cm)dari garis awal ke pusat zona)/(Jarak (cm) dari garis awal ke garis depan pelarut ). Nilai Rf menunjukkan identitas suatu zat yang dicari, contohnya asam amino dan intensitas zona itu dapat digunakan sebagai ukuran konsentrasi dengan membandingkan dengan noda-noda standar.

Selanjutnya wadah/ chamber ditutup dengan tujuan untuk menjenuhkan udara didalamnya menggunakan uap pelarut karena dengan penjenuhan tersebut dapat menghentikan penguapan pelarut. Komponen cuplikan akan terbawa oleh rembesan cuplikan dan kertas dikeluarkan dari wadah setelah pelarut hampir mencapai puncak lembaran kertas.

Berdasarkan hasil pengamatan dilihat bahwa sampel kunyit dan saos tomat memiliki nilai Rf = 0 (nol), sedangkan rosella memiliki nilai Rf pada kelompok 1, 3, 5, 7, 9 berturut-turut adalah 0,094, 0,4, 0,745, 0,849 dan 0,03. Untuk sampel pewarna tekstil pada kelompok 2, 4, 6, 8, 10 berturut-turut adalah 0,725, 0,745, 0,451, 0,615 dan 0,49. Tampak dari percobaan pada sampel kunyit dimana noda warna tidak berpindah, hal ini disebabkan karena senyawa di dalam dalam kunyit (karoten) merupakan senyawa larut lemak. Sehingga tidak bereaksi/ noda warna tidak berpindah saat menggunakan pelarut akuades. Sedangkan sampel rosella memiliki kandungan senyawa yang larut air sehingga terjadi perpindahan noda warna. Begitu juga pada sampel pewarna tekstil dan saos tomat, dimana perpindahan noda warna atau kenaiakan noda warna dipengaruhi oleh senyawa yang terkandung dalam sampel.

KESIMPULAN

·         Kromatografi kertas merupakan kromatografi dengan menggunakan kertas penyaring sebagai penunjang fase diam dan fase bergerak, berupa cairan yang terserap di antara struktur pori kertas.

·         Akuades digunakan sebagai pelarut dalam praktikum kromatografi kertas.

·         Harga Rf pada sampel rosella dan pewarna tekstil lebih besar dibanding nilai Rf pada sampel kunyit dan saus tomat, dimana kunyit dan saus tomat memiliki nilai Rf sebesar nol.

·         Perpindahan noda warna atau kenaiakan noda warna dipengaruhi oleh senyawa yang terkandung dalam sampel.

DAFTAR PUSTAKA

Day & Underwood (1980). Analisa Kimia Kuantitatif. Edisi Keempat. Erlangga : Jakarta.

Khopkar, S.M. (1990). Konsep Dasar Kimia Analitik. Penerbit Universitas Indonesia : Jakarta.

Sudarmadji, Slamet (1989). Analisa Bahan Makanan dan Pertanian. Liberty : Yogyakarta.